集中空调送风中嗜肺军团菌检验仪器试剂耗材
集中空调送风中嗜肺军团菌检验方法
16.1 G.1 总则
本附录规定了用液体冲击法测定集中空调系统送风中的嗜肺军团菌。
16.2 G.2 术语和定义
下列术语和定义适用于本方法。
G.2.1
嗜肺军团菌 legionella pneumophila
样品经培养在GVPG琼脂平板上生成典型菌落，并在BCYE琼脂平板上生长而在L-半光氨酸缺失的BCYE琼脂平板不生长，进一步经生化实验和血清学实验鉴定确认的菌落。
16.3 G.3 仪器和设备
G.3.1 微生物气溶胶浓缩器：采样流量≥100 L/min.，对于直径3.0μm以上粒子其捕集效率≥80%或浓缩比≥8。
G.3.2 液体冲击式微生物气溶胶采样器：采样流量7 L/min-15 L/min.，对于0.5μm粒子的捕集效率≥90%。
G.3.3 离心管：容积50 mL。
G.3.4 平皿：Φ90 mm。
G.3.5 CO2培养箱：35℃～37℃。
G.3.6 紫外灯：波长360 nm±2 nm。
G.3.7 涡旋振荡器。
G．3.8 普通光学显微镜、荧光显微镜。
G．3.9 水浴箱。
16.4 G.4 试剂和培养基
G.4.1 采样吸收液1-GVPC液体培养基(GVPC液体培养基基础 货号026072，规格250克）
G.4.1.1 GVPC添加剂成分：
硫酸盐 10 mg
0.5 mg
80 mg
G.4.1.2 BCYE添加剂成分：
α一酮戊二酸 1．0 g
N-2酰胺基一2胺基乙烷磺酸（ACES） 10.0 g
氢氧化钾 2. 88 g
L-半盐酸盐 0.4 g
焦磷酸铁 0. 25 g
G.4.1.3 吸收液成分：
活性碳 2g
酵母浸出粉 10 g
GVPC添加剂 见G.4.1.1
BCYE添加剂 见G.4.1.2
蒸馏水 1000 mL
G.4.1.4制法：将活性碳、酵母浸出粉加水至1 000 mL，121℃下高压灭菌15 min，加入GVPC添加剂（G．4.1.1）和BCYE添加剂（G.4.1.2），分装于灭菌后的离心管（G.3.3）中备用。
G.4.2 采样吸收液2-酵母提取液
G.4.2.1 吸收液成分：
酵母浸出粉 12 g
蒸馏水 1 000 mL
G.4.2.2制法：将酵母浸出粉加水至1 000 mL，121℃下高压灭菌15 min，分装于灭菌后的离心管（G.3.3）中备用。
G.4.3 化钾溶液[c（HCI·KCI） =0. 01 mol/L]
G.4.3.1成分：
盐酸（0.2 mol／L） 3.9 ml_,
（0.2 mol/L） 20 mL
G.4.3.2制法：将上述成分混合，用1mol/L）调整pH=2.2±0.2，121℃下高压灭菌15 min备用。
G.4.4 其他试剂
G.4.4.1 GVPC琼脂平板。
G.4.4.2 BCYE琼脂平板。
G.4.4.3 BCYE-CYE琼脂平板。
G.4.4.4 革兰氏染色液。
G.4.4.5 马尿酸盐生化反应管。
G.4.4.6 军团菌分型血清试剂。
集中空调送风中嗜肺军团菌检验仪器试剂耗材| 产品名称 | 规格 | 说明 |
| 耐高温高压采样瓶 | 500ml | 可湿热灭菌 |
| 一次性无菌平皿 | 90mm | 10个/包，500个/箱 |
| GVPC琼脂平板 | 20皿/盒 | 用于选择性分离、培养军团菌。 |
| BCYE琼脂平板 | 20皿/盒 | 用于分离、培养军团菌属细菌。 |
| BCYE-CYS琼脂平板 | 20皿/盒 | 用于分离、培养军团菌属细菌。（不含L-半盐酸盐） |
| 采样吸收液1-GVPC 液体培养基 | 20ml*18支 | 用于空调系统中嗜肺军团菌采样时吸收液 |
| 采样吸收液2-酵母提取液 | 20ml*18支 | 用于空调系统中嗜肺军团菌采样时吸收液。 |
| BCYE琼脂基础 | 100g | |
| BCYE生长添加剂 | 10支/盒 | |
| GVPC琼脂基础 | 100g | |
| GVPC添加剂 | 5支/盒 | |
| GVPC液体培养基基础 | 250克 | |
| GVPC液体培养基配套试剂 | | |
| 采样吸收液2-酵母提取液 | 400克 | 酵母浸出粉 |
| 紫外灯（360nm） | 360nm | 含360nm滤光片200 |
| 紫外防护眼镜 | | 建议观察荧光实验使用紫外灯防护眼镜 |
| 3联不锈钢过滤系统 | 3联 | 含3联不锈钢支架，真空泵，，火焰喷枪 |
| 无菌滤膜 | 200张/400张 | |
| 二氧化碳培养箱 | 进口/国产 | 军团菌培养 |
| 离心机 | 国产 | 1000r/min 以上 |
| 漩涡混合器 | 国产 | 用于混合 |
| 军团菌阳性对照菌株 | 1支/株 | 血清型1型 |
| 军团菌生化鉴定套装 | 20测试/盒 | 7种生化管葡萄糖、乳糖、麦芽糖、硝酸盐（还原）、马尿素盐、尿素、明胶、配套试剂各1瓶(茚三酮试剂、硝酸盐还原试剂甲、乙液)，无菌生理盐水 |
| 军团菌大套血清 | 22瓶 | 22瓶（每瓶1毫升）， |
| 军团菌中套血清 | 13瓶 | 13瓶（每瓶2毫升） |
| 军团菌小套血清 | 3瓶 | 包含了见的LP1，LP6以及多价血清 |
| 嗜肺军团菌1型诊断血清 | 1瓶 | 单支 |
| 嗜肺军团菌多价诊断血清（LP2-LP15） | | 2-15型有多价也有单支独立的 。 |
| 军团菌乳胶凝集试剂盒 | 50测试/盒 | 用于嗜肺军团菌血清1型和2~15型的鉴定，可在2分钟内对选择性培养基上分离的可疑菌落进行鉴定 |
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